PSGro人iPSC/ESC胚胎干細胞無血清培養(yǎng)基支持在細胞外基質(zhì)蛋白(如BD Matrigel™)上的人iPSCs或人ESCs的無飼養(yǎng)生長和維持。其性能與市場*的mTeSR™1或E8相比，在生長速度、特征形態(tài)、插件標記、正常核型和向不同胚層的分化等方面都有一定的優(yōu)勢。

PSGro人iPSC/ESC胚胎干細胞無血清培養(yǎng)基

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StemRD     PGroF-500    PSGro-Free®iPSC/ESC Growth Medium    500mL/套

                        人iPSC/ESC胚胎干細胞生長培養(yǎng)基

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內(nèi)容和存儲

PSGro-Free^®（Cat。＃PGroF）包含兩個組件：

需要或建議的其他關鍵試劑

1. 細胞外基質(zhì)蛋白，例如Matrigel TM（BD，cat＃354277）或等同物
2. Accutase（Millipore，SCR005）或Collagenase IV（Invitrogen，17104）或同等物
3. ROCK抑制劑Y-27632（StemRD，Y-01 / -05 / -25）或Thiazovivin（StemRD，Thia-01 / -05 / -25）

中等準備

1. 在4°C下解凍PSGro-Free^®補充劑。 如果需要，可以將解凍的Supplement等分并儲存在-20°C或更低溫度下，但應避免進一步凍融。
2. 要制備PSGro-Free^®*培養(yǎng)基，將1份補充劑加入9份基礎培養(yǎng)基中。
3. 如果需要，可以將抗生素添加到*培養(yǎng)基中。
4. 一旦制成，PSGro-Free^®*培養(yǎng)基在2至8°C的黑暗中儲存時可穩(wěn)定2周。

具有細胞外基質(zhì)蛋白的涂層板，例如Matrigel TM

請參閱制造商的說明。 對于BD Matrigel™，可遵循以下程序：

1. 在冰上解凍Matrigel™。 用預冷的DMEM培養(yǎng)基稀釋基質(zhì)膠1:50。
2. 立即使用稀釋的Matrigel™溶液涂覆組織培養(yǎng)板。 對于6孔板，每孔使用1 mL稀釋的Matrigel™溶液，旋轉(zhuǎn)平板使溶液均勻涂抹。
3. 讓板在37℃下放置1小時或在4℃下放置過夜。

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生長無飼養(yǎng)細胞適應PSGro-Free^®

已經(jīng)在較常用的hiPSC / ESC培養(yǎng)基中生長的人iPSC或ESC可以容易地適應PSGro-Free^®。 用PSGro-Free®進行一輪1：1稀釋的含血清或無血清培養(yǎng)基通常就足夠了。 然而，對于某些媒體和細胞系，可能需要更長和更多的研究生適應。

生長飼養(yǎng)細胞依賴細胞適應PSGro-Free^®

1. 用Accutase，Collagenase IV或同等物質(zhì)分離細胞。
2. 添加以前使用的培養(yǎng)基，輕輕刮去細胞作為聚集體。 理想的聚集體尺寸與其他介質(zhì)類似，過度移液的單細胞可能會降低電鍍效率。
3. 將具有細胞聚集體的懸浮液轉(zhuǎn)移到15ml管中。
4. 在室溫下以200×g離心5分鐘。
5. 丟棄Matrigel™溶液，立即添加PSGro-Free^®（例如，2 mL /孔用于6孔板）。
6. 離心后，棄去上清液，用2mL先前使用的培養(yǎng)基輕輕重懸沉淀。 注意：向培養(yǎng)基中添加ROCK抑制劑（Y-27632或Thiazovivin）可顯著提高存活率和電鍍效率。
7. 用PSGro-Free®將先前使用的培養(yǎng)基中的細胞聚集體轉(zhuǎn)移到孔中。 混合。 輕輕地。
8. 在37℃，5％CO 2和95％濕度下培養(yǎng)細胞。
9. 如果星期五播種細胞，請在周一更換培養(yǎng)基至4 mL PSGro-Free®（周末無需更換）。 如果細胞在一周中的其他日子播種，則在第二天更換。

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PSGro-Free^®中冷凍細胞的回收

1. 在37°C水浴中快速解凍hiPSC或hESC，將內(nèi)容物轉(zhuǎn)移至15 mL管中。 在溫和混合下將10mL先前用于細胞的培養(yǎng)基滴加到管中。
2. 在室溫下以200×g離心細胞5分鐘。
3. 丟棄Matrigel™溶液，立即添加PSGro-Free^®（例如，2 mL /孔用于6孔板）。
4. 離心后，棄去上清液，用2mL先前使用的培養(yǎng)基輕輕重懸沉淀。 注意：向培養(yǎng)基中添加ROCK抑制劑（Y-27632或Thiazovivin）可顯著提高存活率和電鍍效率。
5. 用PSGro-Free®將先前使用的培養(yǎng)基中的細胞聚集體轉(zhuǎn)移到平板上。 輕輕混合。
6. 在37℃，5％CO 2和95％濕度下培養(yǎng)細胞。
7. 第二天將培養(yǎng)基更換為4 mL PSGro-Free®。

在無飼養(yǎng)細胞條件下傳代PSGro-Free^®中的細胞

1. 在顯微鏡下觀察以識別分化區(qū)域。 使用平板底部的鏡頭標記（例如，6孔板）標記分化的菌落
2. 通過用移液管*或抽吸刮擦去除分化區(qū)域。
3. 從細胞培養(yǎng)物中吸出培養(yǎng)基并用PBS沖洗。
4. 每孔加入0.5 mL Accutase或Collagenase IV。 在室溫下靜置1-2分鐘。
5. 取出Accutase，用2 mL PSGro-Free®輕輕沖洗2-3次，以去除殘留的酶。
6. 加入2 mL /孔PSGro-Free®并用細胞刮刀刮掉菌落。
7. 將分離的細胞聚集體轉(zhuǎn)移至15 mL錐形管中，并用另外2 mL PSGro-Free®沖洗孔以收集任何剩余的聚集體。
8. 在室溫下以200×g離心5分鐘。
9. 吸出上清液。 通過輕輕移液將沉淀重懸于4 mL PSGro-Free®中。 注意：向培養(yǎng)基中添加ROCK抑制劑（Y-27632或Thiazovivin）可顯著提高存活率和電鍍效率。
10. 用PSGro-Free®將細胞聚集體鋪在涂有Matrigel™的新平板上。
11. 在37℃，5％CO 2和95％濕度下培養(yǎng)細胞。 每天更換介質(zhì)。
12. 如果星期五播種細胞，請在周一更換培養(yǎng)基至4 mL PSGro-Free®（周末無需更換）。 如果細胞在一周中的其他日子播種，則在第二天更換。 注意：如果菌落處于*密度，細胞可以每隔5-7天分裂，使用1：5到1:10的分裂。

PSGro-Free^®中細胞的低溫保存

1. 準備含有90％PSGro-Free®和10％DMSO的冷凍培養(yǎng)基。 注意：向培養(yǎng)基中添加ROCK抑制劑（Y-27632或Thiazovivin）可顯著提高存活率和電鍍效率。
2. 在無飼料條件下，從PSGro-Free^®中傳代細胞進行步驟1-8
3. 輕輕吸出上清液，注意保持細胞沉淀完整。
4. 輕輕地將沉淀重懸于冷凍培養(yǎng)基中，注意使細胞聚集體比通常用于傳代的細胞更大。
5. 將冷凍培養(yǎng)基中的1mL細胞聚集體轉(zhuǎn)移到每個標記的冷凍管中。
6. 將小瓶置于異丙醇冷凍容器中，并將容器置于-80℃
7. 第二天轉(zhuǎn)移到液氮罐中進行長期儲存。

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