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淋巴細胞分離液分離白細胞方法步驟
更新時間：2021-05-24 點擊次數：2600
淋巴細胞分離液是一種用于分離人外周血淋巴細胞的無菌、低內毒素水平的密度梯度分離液。其分離原理是根據血細胞的密度差異，通過離心使一定密度的細胞按相應密度梯度分布，從而將淋巴細胞從人外周血或臍帶血中分離出來。接下來為您介紹下淋巴細胞分離液分離白細胞方法步驟。
提供一個常規的方法供參考：
首先，需要注意的是在分離前使分離液恢復至室溫，離心時也應保持室溫，因為此條件下分離液的密度為標注密度。
1. 新鮮血（肝素抗凝20u/ml）＋1640（無血清）培養液或PBS按照1：1 稀釋；
2. 在15ml或50ml塑料離心管中預先加入淋巴細胞分離液，使分離液：稀釋后血液=1:1；
3.小心的將稀釋后的血液加到分離液的上面；
4. 室溫 2600rpm 離心20分鐘；
5. 取出離心管，小心吸出白白的那一層，重懸于5倍體積的不*培養液或PBS中，混勻；
6.室溫 1500rpm 離心5分鐘；
7.吸棄上清，再加4ml不*培養液，混勻；
8.室溫 1000rpm離心5分鐘；
9.棄上清，用*培養液稀釋至2ml；
10.淋巴細胞記數；
11.按所需濃度及實驗目的稀釋細胞，種板。
淋巴細胞分離液可用于體外分離外周淋巴血細胞，也可以從其他來源中分離單核細胞，包括臍帶血細胞和骨髓細胞，適用于從血液及組織勻漿中分離所需細胞，在醫療和醫學生物中廣泛應用。其他人及動物多種比重細胞分離液。
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